氯霉素檢測包括微生物法、色譜法、免疫測定法。微生物法易操作,費用低,但靈敏度低,特異性差。色譜法準確可靠、靈敏度高,檢測極限可達到0. 1μgPkg ,但前處理步驟多,回收率偏低 。
一、氯霉素檢測的樣品制備:
a.將3克已均質(zhì)的樣品放入15mL離心管中,再加入6mL乙酸乙酯,震蕩5分鐘。
b.用離心機離心1700×g10分鐘,取2mL上層液(乙酸乙酯)至10mL玻璃管中,于50℃下,利用氮氣將有機溶劑吹干。
c.在此玻璃管中加入正己烷1mL,先將殘余物*溶解后,再加入1mL樣品稀釋液,震蕩30秒鐘。
d.用離心機離心1700×g 10分鐘,利用吸管吸去包含中問乳化層部分的上層液(正己烷),再吸取下層液(水層)備用。
稀釋倍數(shù):1
若待測物為白蝦可按以下流程將樣品做8倍濃縮以增加檢品敏感度
a.將6克已均質(zhì)的樣品放入15mL離心管中,再加入6mL乙酸乙酯,震蕩5分鐘。
b.用離心機離心1700×g 10分鐘,取4mL上層液(乙酸乙酯)至10mL玻璃管中,于50℃下,利用氮氣將有機溶劑吹干。
c.在此玻璃管中加入正己烷2mL,先將殘余物*溶解后,再加入0.5mL樣品稀釋液,震蕩30秒鐘。
d.用離心機離心1700×g 10分鐘,利用吸管吸去包含中問乳化層部分的上層液(正己烷),再吸取下層液(水層)備用。
稀釋倍數(shù):0.125
二、氯霉素檢測的判定結(jié)果:
1. 計算B/B0值。用樣品或標準液吸光度值(B)除以零標準吸光度值(B0)再乘以100%。
2. 以B/B0值為縱坐標,以標樣濃度的對數(shù)值為橫坐標,做標準半對數(shù)曲線。
3. 根據(jù)每個樣品的B/B0值就可從曲線上讀出相對應(yīng)樣品的濃度。
4. 由于樣品經(jīng)過了預(yù)先稀釋,因此根據(jù)標準曲線所得出的樣品濃度一定要再乘以其稀釋倍數(shù)。