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斑點雜交實驗服務

斑點雜交實驗服務

產(chǎn)品型號:

所屬分類:分子生物學實驗

產(chǎn)品時間:2024-08-30

簡要描述:斑點雜交實驗服務,慢病毒,腺病毒,RNAI類, 分子生物實驗,病理實驗,免疫學實驗,細胞實驗,動物實驗,蛋白組學實驗,芯片類實驗,并為廣大客戶朋友們提供課題設計指導、基金申請指導、SCI. 核心期刊等服務。

詳細說明:

斑點雜交實驗服務

 

 

實驗技術(shù)簡介:斑點雜交(Dotblot) 是將被檢標本點到膜上,烘烤固定。這種方法耗時短,可做半定量分析。- 張膜上可同時檢測多個樣品,為使點樣準確方便,市售有多種多管吸印儀(Manifold) , 如MinifoldI和II. Smart Botter(Wealtec).Bio-Dot(Bio-Rad)和Hybri-Dot,它們有許多孔,樣品加到孔中,在負壓下就會流到膜上呈斑點狀或狹縫狀。反復沖洗進樣孔,取出膜烤干或紫外線照射以固定標本,這時的膜就可以進行雜交。

 

實驗技術(shù)原理:

斑點雜交是指將待測的DNA變性后點加在硝酸纖維素膜(或尼龍膜、NC膜)上, 用已標記的探針進行雜交,洗膜(除去未接合的探針), 放射自顯影,判斷是否有雜交及其雜交強度,主要用于基因缺失或拷貝數(shù)改變的檢測。

 

實驗操作流程:

1. DNA斑點雜交

①先將膜在水中浸濕,再放到15*SSC中。

②將DNA樣品溶于水或TE,煮沸5min,冰中速冷。

③用鉛筆在濾膜上標好位置將DNA點樣于膜上,每個樣品-般點5ul(2~10μg DNA)。

④將膜烘干,密封保存?zhèn)溆谩?/span>

2、RNA斑點雜交

與上法類似、,每個樣品至多加10μg總RNA (經(jīng)酚/氨0仿或異硫青酸胍提取純化)。 方法是將RNA溶于5μl DEPC水,加5μI甲醛/SSC緩沖液(10*SSC中含6.15moI/L甲醛) ,使RNA變性,然后取5-8μI點樣于處理好的濾膜上,烘干。

3、完整細胞斑點雜交

應用類似檢測細菌菌落的方法,可以對細胞培養(yǎng)物的特異序列進行快速檢測,將整個細胞點到膜上,經(jīng)NaOH處理,使DNA暴露、變性和固定,再按常規(guī)方法進行雜交與檢測。有人曾用此法從105個培養(yǎng)細胞中檢測到至少5pg的Epstein-Barr病毒DNA。完整細胞斑點印跡法可以用于篩選大量標本,因為它使細胞直接在膜上溶解,所以DNA含量甚至比常用的提取法還高,又不影響與32P標記的探針雜交,但它不適用于非放射性標記探針,因為DNA純度不夠,會產(chǎn)生高本底。

 

實驗注意事項:

客戶提供:

TotalRNA (DNA) ≥20ug,濃度> 1ug/ul, A260/A280>1.8;提供標記后的探針,需同時告知標記后探針的濃度及活性,待

檢測目的基因的Genbank序列號。

 

交付標準:

1、圖片

2.完整項目報告(材料、試劑、儀器、方法、數(shù)據(jù)分析、實驗結(jié)果)

其他:

1.點樣量不要太大,否則雜交后,X光片上點太大,互相影響。

點樣前尼龍膜無需預處理,點樣后自然晾干后, 分別在變性液和中和液中進行變性和中和。

收費標準/服務周期/提供結(jié)果:

歡迎咨詢詳談,我們會根據(jù)您的方案及需求制定詳細的服務協(xié)議。

更多實驗技術(shù)服務請瀏覽網(wǎng)站其他內(nèi)容,或來電詳詢!

 

實驗代做服務:

ELISA試劑盒免費代檢測

CCK8檢測

基因組DNA提取

 

蛋白相互作用分析

Western Blot

免疫組化

熒光定量PCR

動物模型服務

流式細胞檢測

ROS氧化分析

激光共聚焦

DNA甲基化實驗

細胞劃痕

鈣離子濃度檢測

掃描電鏡實驗

microRNA測序

動物實驗

探針合成

ATP/ADP檢測

石蠟/冰凍切片

定點突變

線粒體膜電位(MMP)檢測

細胞生長曲線的測定

藥理毒理動物實驗

 

免疫共沉淀

真核表達載體構(gòu)建

染色質(zhì)免疫沉淀CHIP

非標定量(Label-free)實驗



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